چگونه ستون را پس از آلودگی تمیز و بازسازی کنیم؟

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday

Summary: هنگامی که یک ستون کروماتوگرافی آلوده است، رفتار کروماتوگرافی آن تا حدودی با یک ستون غیر آلوده متفاوت خواهد بود. ستون های آلوده می توانند باعث مشکلات فشار برگشتی شوند. ستون فاز معکوس آلوده باید تمیز و بازسازی شود تا شرایط عملیاتی اولیه بازگردد. ......

هنگامی که یک ستون کروماتوگرافی آلوده است، رفتار کروماتوگرافی آن تا حدودی با یک ستون غیر آلوده متفاوت خواهد بود. ستون های آلوده می توانند باعث مشکلات فشار برگشتی شوند. ستون فاز معکوس آلوده باید تمیز و بازسازی شود تا شرایط عملیاتی اولیه بازگردد.
کلید بازسازی یک ستون HPLC آلوده، شناخت ماهیت آلاینده و یافتن حلال مناسب برای حذف آن است. اگر آلودگی ناشی از تجمع مواد به شدت حفظ شده در طی تزریق های مکرر باشد، اقدامات ساده برای حذف این آلاینده ها اغلب می تواند رفتار کروماتوگرافی را بازیابی کند. گاهی پس از انجام عملیات های زیاد، ستون کروماتوگرافی با حلال 90-100% B (حلال قوی تر در سیستم فاز معکوس دو حلالی) به مدت 20 حجم شستشو داده می شود تا آلاینده ها از بین بروند. به عنوان مثال، حلال های غیرآبی مانند متانول، استونیتریل و تتراهیدروفوران را می توان برای چربی های باقیمانده در ستون استفاده کرد.

به طور کلی، همه روش های تمیز کردن اشکال مشابهی دارند. حلال های مورد استفاده با قدرت حلال افزایش می یابد. اغلب آخرین حلال بسیار آبگریز است (مانند اتیل استات یا حتی هیدروکربن) و می تواند برای حل کردن مواد غیر قطبی مانند لیپیدها و روغن ها استفاده شود. ما باید اطمینان حاصل کنیم که هر حلال در یک سری حلال می تواند با حلال بعدی مخلوط شود.
در پایان فرآیند تمیز کردن، لازم است با کمک یک حلال امتزاج پذیر با قدرت متوسط به سیستم حلال اصلی برگردید. به عنوان مثال ایزوپروپانول به عنوان یک مرحله میانی حلال بسیار خوبی است زیرا با n-هگزان یا دی کلرومتان و همچنین با حلال های فاز آب قابل اختلاط است. با این حال، ویسکوزیته ایزوپروپانول بسیار بالا است و برای جلوگیری از فشار بیش از حد پمپ باید از دبی کم اطمینان حاصل شود. هنگام شستشوی ستون کروماتوگرافی، مایع شستشو مستقیماً از انتهای خروجی ستون کروماتوگرافی به بطری زباله متصل می شود و نمی تواند از طریق سلول تشخیص جریان یابد تا از آلودگی سلول تشخیص جلوگیری شود.
ستون کروماتوگرافی فاز معکوس از محلول بافر استفاده نمی کند، لطفاً از سری حلال زیر برای بازسازی استفاده کنید:
100٪ متانول → 100٪ استونیتریل → 75٪ استونیتریل - 25٪ ایزوپروپانول → 100٪ ایزوپروپانول → 100٪ متیلن کلرید → 100٪ n-هگزان → 100٪ متیلن کلرید → 100٪ متیلن کلرید 100٪ ایزوپروپانول →0.
ستون کروماتوگرافی فاز معکوس از محلول بافر استفاده می کند، لطفاً از سری حلال زیر برای بازسازی استفاده کنید:
آب → استونیتریل → کلروفرم (یا ایزوپروپانول) → استونیتریل → آب.