چگونه ستون صحیح را انتخاب کنیم؟

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-04 17:32:46 Thursday

Summary: ① ماتریس بسته بندی ستون کروماتوگرافی الف. ماتریس ژل سیلیکا: خلوص بالا، هزینه کم، استحکام بالا، اصلاح شیمیایی آسان، اما محدوده pH محدود است. اکثر پرکننده‌های ماتریکس سیلیکا بین pH 2-8 پایدار هستند، اما فاز پیوندی سیلیکاژل اصلاح‌شده مخصوصاً می‌ت......

① ماتریس بسته بندی ستون کروماتوگرافی
الف. ماتریس ژل سیلیکا: خلوص بالا، هزینه کم، استحکام بالا، اصلاح شیمیایی آسان، اما محدوده pH محدود است. اکثر پرکننده‌های ماتریکس سیلیکا بین pH 2-8 پایدار هستند، اما فاز پیوندی سیلیکاژل اصلاح‌شده مخصوصاً می‌تواند در pH 1.5-10 تثبیت شود.
ب. ماتریس پلیمری: محدوده کاربرد وسیع pH، دمای پایدار (دمای بالا می تواند به بالای 80 درجه برسد)، و مقاومت مکانیکی کم.
②شکل ذرات
بیشتر پرکننده های HPLC مدرن، ذرات کروی هستند، اما گاهی اوقات ذرات نامنظم هستند. ذرات کروی فشار ستون کمتر، کارایی و پایداری بیشتر ستون و طول عمر ستون را بیشتر می کنند. هنگام استفاده از فاز فعال با ویسکوزیته بالا؛ ذرات نامنظم دارای سطح ویژه بزرگتر و قیمت نسبتاً پایینی هستند.
③ اندازه ذرات
هرچه اندازه ذرات کوچکتر باشد، راندمان بالاتر و وضوح بالاتر است، اما در عین حال منجر به افت فشار ستون بیشتر می شود. مواد بسته بندی 1.5-3μm را برای حل برخی از نمونه های پیچیده انتخاب کنید، UPLC می تواند از بسته بندی 1.5μm استفاده کند. بسته بندی با اندازه ذرات 10 میکرومتر یا بزرگتر به عنوان ستون نیمه آماده سازی یا آماده سازی استفاده می شود.
④محتوای کربن
محتوای کربن یک ستون کروماتوگرافی به نسبت فاز پیوندی روی سطح ژل سیلیکا اشاره دارد که به سطح خاص و پوشش پیوند مربوط می شود. محتوای کربن بالا ظرفیت ستون، وضوح و زمان تجزیه و تحلیل را بهبود می بخشد و برای نمونه های پیچیده ای که به وضوح بالا نیاز دارند استفاده می شود. محتوای کربن کم زمان آنالیز کوتاهی دارد و گزینش پذیری متفاوتی از خود نشان می دهد و برای آنالیز سریع نمونه های ساده و فازهای فعال پر حاوی آب استفاده می شود. نمونه های وضعیت به طور کلی، محتوای کربن C18 از 7-19٪ متغیر است.
⑤ اندازه منافذ و سطح خاص
محیط جذب HPLC ذرات متخلخل است و بیشتر سطح واکنش در منافذ است. بنابراین مولکول ها باید وارد منافذ شوند تا جذب و جدا شوند.
اندازه منافذ ستون کروماتوگرافی و سطح ویژه دو مفهوم مکمل یکدیگر هستند. اندازه منافذ کوچک و سطح ویژه بزرگ است و بالعکس. سطح ویژه بزرگ، افزایش واکنش بین نمونه و فاز پیوند شده، افزایش ذخیره سازی، بارگیری نمونه و جداسازی اجزای پیچیده. سطح ویژه کوچک، زمان تعادل سریع، مناسب برای تجزیه و تحلیل گرادیان.
⑥ حجم منافذ و استحکام مکانیکی
حجم منافذ، همچنین به عنوان "حجم منافذ" شناخته می شود. به اندازه حجم خالی در هر ذره اشاره دارد. به خوبی می تواند مقاومت مکانیکی پرکننده را منعکس کند. پرکننده‌های با حجم منافذ زیاد استحکام مکانیکی کمی ضعیف‌تر از پرکننده‌هایی با حجم منافذ کوچک دارند. پرکننده‌هایی با حجم منافذ 1.5 میلی‌لیتر بر گرم یا کمتر بیشتر برای جداسازی HPLC استفاده می‌شوند، در حالی که پرکننده‌هایی با حجم منافذ بیشتر از 1.5 میلی‌لیتر بر گرم برای کروماتوگرافی حذف اندازه و کروماتوگرافی فشار پایین استفاده می‌شوند.
⑦ کلاهک انتهایی
درپوش انتهایی ستون به دلیل برهمکنش با گروه‌های سیلانول در معرض می‌تواند پیک‌های باطله ترکیبات پایه قطبی را کاهش دهد. فاز باند انسدادی، گزینش پذیری متفاوتی نسبت به فاز باند مسدود شده، به خصوص برای نمونه های قطبی خواهد داشت.